ayudas para la investigación de vacunas reunión del grupo de trabajo

introducción

Respuesta inmune a antígenos persistente

El Dr. Barton Haynes, director del Instituto de Vacunas Humanas, dio la bienvenida a los participantes de la reunión y anunció tres nuevos miembros del grupo de trabajo: Dr. Susan Buchbinder, el Dr. Ian Wilson, y el Dr. Joseph Sodroski (no presente). El Dr. Haynes indicó que esta reunión se centraría en el estado de la investigación del vector, el examen de la fase de investigación de vector actual, la evaluación de las lagunas en la investigación, y determinar si ciertos vectores deben recibir mayor énfasis de la investigación.

El Dr. James Bradac del Instituto Nacional de Alergia y Enfermedades Infecciosas (theernment) declaró que la reunión debería también considerar la persistencia del vector y fondos para la investigación nueva en vectores. El Dr. Bradac revisado los aspectos de las estrategias de vacunación y enumeró las áreas de investigación financiados actualmente. Se alentó a los participantes de la reunión a considerar cómo los muchos vectores comparan con respecto a la seguridad de respuesta inmune, respuesta inmunitaria preexistente, el tamaño máximo de inserción, el nivel de expresión del antígeno, y mucho más. Hay una necesidad de definir la persistencia y considerar la evidencia de que la persistencia conduce a una fuerte respuesta inmune, durable. El Dr. Bradac alentó a los miembros AVRWG considerar las modalidades de sensibilización / refuerzo, el uso de estudios comparativos de cabeza a cabeza, y si el campo está recibiendo un amplio apoyo.

Vectores de virus adeno-asociado

El Dr. Rafi Ahmed, Emory Centro de Vacunas; Rafi Ahmed presentó datos recientes de su laboratorio en relación con el establecimiento de la memoria humoral y celular utilizando el modelo murino de infección por LCMV.

Los tipos de virus del herpes 1 y 2 Vectores

los receptores de la reorientación únicamente se expresaron en las células efectoras se encuentran en el bazo LN, inguinal y mesentérica.

Experimento 2. La transferencia adoptiva ingenua, efectores o células T CD8 de memoria transgénicas a ratones ingenuos y cosecha de IEL 16 h después de la transferencia .; Sólo se encontraron células efectoras que expresan marcadores de recalada de la mucosa a migrar a la mucosa intestinal .; Conclusión: la inmunización de las mucosas es la mejor para la inducción de inmunidad de la mucosa pero las células efectoras de bazo también capaz de homing para destripar el tejido

Gamma herpesvirus Vectores

Ricitos de Oro modeladores diferenciación de memoria CD8 células T; Este modelo propone que se requiere “justo” cantidad de antígeno de fuerza / de la señal y la duración máxima de la aptitud para mantener las células T y la memoria.

Durante una infección crónica de células T CD8 + específicas para el virus no pudieron adquirir memoria cardenal propiedades de células T de la persistencia del antígeno independiente a largo plazo.

Vectores de virus de la rabia

Otros ejemplos incluyen el VIH, HCV, HBV

Experimentar. Comparación de la infección con virus vivos (LCMV) vs inmunización con ADN para la memoria, el recuerdo, y la protección.

Primer TCR animales transgénicos con ADN (LCMV gp33) o infección LCMV

A los cuatro meses de transferencia de números iguales de células P14TCR tg T de ratones inmunizados en ratones ingenuos y / impulso desafío con rVVgp33 y medir las células positivas a tetrámero (figura 1) para la respuesta de recuerdo o títulos de virus en los ovarios medida desafío para la protección.

referencias

El Dr. Philip Johnson, el Hospital de Niños de Filadelfia

El Dr. Johnson describe la biología, estructura genómica, y la estructura de las partículas virales de AAV. El vector de AAV está desprovista de cualquiera de las secuencias de AAV excepto aproximadamente 400 nucleótidos de secuencias de repetición invertidas en ambos extremos. Su vector AAV contiene el promotor CMV y secuencias señal poli (A). Demostró que los vectores son altamente eficiente vehículo de suministro de ADN para la transducción de ambos genes independientes (para la terapia génica) y los genes no propios (para las vacunas).

Tres vacunas SIV se han construido: SIV rev-gag-PR-ΔRT-RRE, SIV env-rev, y SIV RT-IN. Los resultados experimentales muestran que las vacunas SIV rAAV provocan respuestas inmunes humorales y celulares específicas de antígeno en macacos. SIVsm patogénico / E600 se utiliza para desafiar los animales vacunados. La protección se demuestra en los retos de dosis baja y baja carga viral se ha demostrado en los retos de dosis altas. También desarrolló vacunas contra el VIH utilizando tanto el serotipo 1 y 2 AAV para vacunas diseñadas para clado C VIH-1. Estudios de inmunogenicidad a estas vacunas recombinantes se llevaron a cabo en monos. Los resultados mostraron que la vacuna fue bien tolerada y no se detectó integración. Con la ayuda de IAVI, una fase fui iniciado ensayo clínico de rAAV / VIH-1 en humanos en diciembre de 2003 y ahora estaba inscrito plenamente en Bélgica y Alemania.

El Dr. David Knipe, Escuela de Medicina de Harvard

David Knipe dio un resumen sobre la construcción de competentes HSV-1 vectores competentes para la replicación y la replicación defectuosa, pero latencia que expresan env SIV, sobre SIV + gag / pol, env y SIV + nef.

* Vector d 106 (HSV-1) fue diseñado para eliminar completamente la toxicidad asociada con la infección por HSV. se derogó la expresión de todos los 5 ‘del gen temprano intermedio (IE). Estos son los polipéptidos celulares infectados (ICP) 0, 4, 22, 27, y 47 y se han demostrado tener funciones reguladoras que afectan a la expresión coordinada del genoma de HSV. ICP4 y ICP27 son absolutamente esenciales para la replicación del virus. La función de ICP47 puede ser más relevante in vivo, donde bloquea la presentación de péptidos antigénicos a las células CD8 + y puede ayudar al virus a escapar de la vigilancia inmune.

Los datos también se mostró de una vacuna candidata de replicación defectuosa mutante del herpes genital (HSV-2 dl5-29) .; En un modelo de cobaya vio

El Dr. Ronald Desrosiers, Escuela de Medicina de Harvard

Dr. Ronald Desrosiers presenta en vectores de virus herpes recombinantes con énfasis en rhadinoviruses rhesus (RRV) y linfocriptovirus rhesus (LCV) y su potencial en modelos animales para VHSK y EBV, respectivamente. También presentó en un sistema de infección por VIS solo ciclo.

Ventajas de los herpes virus como vectores

Las ventajas potenciales de HVSK (Kaposi virus asociado al sarcoma) -HHV-8 como un vector

Las ventajas potenciales de rhadinoviruses rhesus (RRV) como un modelo animal (RRV es un pariente cercano de HVSK / HHV-8)

Rhesus linfocriptovirus (LCV) como un modelo animal para EBV

sistema de la infección solo ciclo SIV; El sistema de la infección por SIV solo ciclo se basa en un cambio de marco mutante complementado-gag-pol en el sitio de deslizamiento ribosoma. Los datos indican que no se propagan in vitro y se borran de forma rápida en los animales. Este sistema de ciclo único también genera respuestas de anticuerpos neutralizantes a SIV251 aislado e induce respuestas de ELISPOT a péptidos gag de VIS. Este mutante también reduce el punto de equilibrio viral en algunos de los animales expuestos.

El Dr. Matthias Schnell, Thomas Jefferson University

virus de la rabia atenuado (RV), un miembro de la familia Rhabdovirus de virus de ARN-cadena negativa, ofrece varias ventajas como un potencial vector de vacuna: (1) El genoma modular se organiza con parada de la transcripción corto / comienzan secuencias que flanquean los genes, por lo que es relativamente fácil de manipular. (2) El genoma puede acomodar grandes (y múltiples genes extraños) sin afectar a la replicación viral. (3) Dado que el genoma es RNA, que se replica exclusivamente en el citoplasma, lo que elimina cualquier posibilidad de recombinación, reversión, o la integración. (4) No es insignificante seropositividad a RV en la población general para interferir con la vacuna “toma”. (5) El virus es no citopático en las células infectadas y expresa niveles moderados a altos de proteínas extrañas durante un período prolongado de tiempo. (6) Además de atenuación de la cepa de la vacuna de RV ha resultado en varios vectores de segunda generación RV altamente atenuadas que son no citopático, incluso después de la infección intracraneal en ratones. (7) RV se replica en las superficies mucosas, en los que puede generar la respuesta inmune de la mucosa.

RV recombinante que expresa el VIH-1 Gag fue capaz de generar CTL específicas de gag en ratones, y RV recombinantes que expresan el VIH-1 Env generó CTL-gp160 específica del sobre de larga duración que fueron capaces de células diana cruzada Kill expresando diferente (no vacuna ) proteínas de la envoltura del VIH-1. El vector env RV-VIH-1 también genera anticuerpos que se unen en los estudios del ratón anti-sobre. En un estudio preliminar en cuatro macacos rhesus, los vectores basados ​​en RV mostraron ser no patógeno y seguro, siendo observaron signos clínicos. Los primates no humanos fueron infectadas con RV que expresan SHIV89.6P Env y Gag SIVmac239 y respuestas inmunes humorales sustanciales generadas al VIH-1 sobre de gp140 por 4 semanas después de la inmunización. Los anticuerpos anti-sobre, que aún eran positivos (por ELISA) en 3 de 4 animales, se estimularon con una segunda inoculación de la vacuna en 55 semanas. las respuestas inmunes celulares específicas virales no eran lo suficientemente fuertes como para ser detectada después de que cualquiera de inmunización.

Se están realizando estudios para desarrollar vectores de segunda generación RV que están más atenuada y más seguro mediante la adición de mutaciones en el gen (G) glicoproteína de RV. Los virus atenuados tienen buenos perfiles de replicación, generan respuestas celulares en ratones, y no causan infecciones letales en ratones después de la inoculación intracraneal. En otros estudios, en los que citolítica y versiones no citolítica de RV se compararon en ratones, se encontró que ambos virus inducen niveles similares de las respuestas de memoria celular, pero que el RV no citolítica da mejores respuestas inmunes humorales, por lo que es el preferido vector, ya que es probable que se necesite tanto la inmunidad celular y humoral de una vacuna eficaz contra el VIH.

El Dr. Robert-Guroff Marjorie, Instituto Nacional del Cáncer

El uso de vectores de replicación de adenovirus (Ad) para la vacuna contra el SIDA ofrece varias ventajas potenciales. vacunas basadas en Ad inducir tanto la inmunidad celular y humoral, y pueden dirigirse a sitios inductivos de la mucosa en el tracto y / o el intestino respiratorio superior, que conduce a la generación de la respuesta inmune en los sitios de la mucosa que son los objetivos en la transmisión del VIH. El vector de replicación competente conduce a la expresión prolongada de los genes insertados, dando el potencial de una mayor duración de la respuesta inmune, y hay una larga historia (25 años y aproximadamente 10 millones de dosis) de seguridad con el de tipo salvaje Ad4 y Ad7 orales vacunas.

En un estudio de inmunogenicidad comparativa de replicarse y no replicante recombinantes Ad realizados en chimpancés, la replicación Ad5DE3 / HIVMN env / rev y la Ad5DE1 no replicante, E3 / HIVMN env / rev se administraron por vía intranasal a grupos separados de 5 chimpancés en 0 y 13 semanas, y ambos grupos de animales se reforzaron posteriormente con la proteína HIVSF162 gp140DV2 en MF-59 adyuvante en las semanas 37 y 49. La replicación Ad / VIH recombinantes inducen respuestas inmunitarias celulares fuertes (medido por IFN-g células secretoras después de antígeno-específica estimulación), las respuestas proliferativas más fuertes, y los títulos de anticuerpos anti-del sobre más altos que los vectores de adenovirus no replicantes. Los sueros de algunos animales en ambos grupos fueron capaces de neutralizar aislados primarios del VIH, con los chimpancés que recibieron el vector de replicación que muestra mejor (pero no estadísticamente significativa) de neutralización. Los replicantes Ad recombinantes fueron significativamente mejores en la obtención de anticuerpos que median la muerte por ADCC de las células diana.

La eficacia protectora de replicación vectores de Ad competentes se demostró usando Ad5 gama de huéspedes recombinantes mutante-SIV para la inmunización de macacos rhesus. En este estudio (publicado en Malkevitch et al, J. Immunol 2003;.. Patterson et al, J. Virol 2003;…. Y Patterson et al, J. Virol 2004) los animales fueron inmunizados con recombinantes Ad-SIV por vía oral y por vía intranasal en la semana 0, intratecal en la semana 12, a continuación, impulsado con proteína de la cubierta o la envoltura de SIV péptidos por vía intramuscular en las semanas 24 y 36. los recombinantes Ad-SIV para cada grupo fueron los siguientes: (1) Ad5hr-SIVenv / rev, (2 ) Ad5hr-SIVenv / vuelta + mordaza, (3) Ad5hr-SIVenv / rev nef +, (4) Ad5hr-SIVenv / rev nef + gag +. Estos animales fueron reforzados con SIVgp120 en las semanas 24 y 36. Grupo (5) Ad5hr-SIVenv / rev-animales inmunizados se reforzaron con un polímero de péptidos que imitan la región de unión de CD4 de gp120. Todos los animales fueron desafiados intrarrectal con SIVmac251 patógena (la cepa original, proporcionado por R. Desrosiers). Después de la exposición, todos los animales de control fueron infectados y mostraron el patrón típico de la replicación del SIV, con los picos de carga virus agudos en el rango de 107 a 109, con los puntos de ajuste a las 20 semanas de 105 – 107. En contraste, 39% de la animales inmunizados (en todos los grupos) mostraron un fuerte control de la replicación SIV. Ocho de los 30 animales inmunizados replicación del virus controlados por debajo o en el umbral de detección (6 de ellos hacerlo por 8 semanas después de la exposición), y 4 de los macacos no tenían viremia detectable en plasma en cualquier punto después del desafío, aunque DNA viral podía detectar. control de viremia en punto de ajuste se correlacionó con las respuestas celulares (IFN-g) ELISPOT contra env y rev péptidos, y la reducción de la viremia durante la infección aguda se correlacionó con los anticuerpos de unión Env-específicos que poseen actividad ADCC.

Cuando las células T CD8 + de los animales que mostraron un ajuste de control de la viremia se agotaron con el anticuerpo, la replicación del virus aumentó de manera significativa, luego se dejó caer de nuevo como se repusieron las células T CD8 +, lo que demuestra que el control de la viremia en los animales se asoció con CD8 SIV + específicas respuestas de células T. La protección otorgada por el curso de la inmunización fue de larga duración. Sin intervenir la inmunización, 8 de 11 animales controlador se mantuvieron protegidos contra un segundo desafío SIVmac251 un año más tarde.

En resumen, la replicación de adenovirus vacunas contra el VIH parecen capaces de provocar respuestas inmunes celulares y humorales-viral específico sistémicas y de la mucosa que son potentes y de larga duración y puede resultar en un control de la replicación del virus. El Dr. Guroff está planeando una fase I para evaluar la respuesta inmune a las vacunas humanas RAD-VIH, y es el establecimiento de estudios de colaboración en primates no humanos para tratar de mejorar el nivel de protección ofrecido por este enfoque.

El Dr. David Strayer, Jefferson Medical College

Los vectores de adenovirus

El Dr. Strayer está explorando el uso de vectores recombinantes SV40 (RSV o rSV40) para generar la inmunidad adaptativa a los antígenos de VIH y SIV. Recordó que de protección correlaciones inmunitarias adaptativas son todavía desconocidos como a los antígenos virales óptimas y qué ensayos serían predecir o identificarlos. Él cree que ciertas suposiciones generales pueden ser engañosos: entre otros, que CMI (con IFN-gamma ELISPOT leer-outs) que es más importante, que los altos niveles de antígeno insertan plomo expresión a una mejor CMI, que se necesita un vector altamente antigénica, y que la inmunidad debe lograrse con 1 o 2 inoculaciones. Se citaron varias ventajas potenciales de vectores rSV40: hecho a altas concentraciones (≈1011 UI / ml) y se pueden almacenar liofilizado a temperatura ambiente; transducción de múltiples tipos de células inmunes (macrófagos, células T / B, DCS, y monocitos) y de integrarse en las células en reposo o en bicicleta rápidamente, ya pesar de esta propiedad potencialmente ventajoso para antigenicidad, su historia de seguridad es relativamente alta (pero claramente sigue siendo una preocupación); vectores SV40 “sin entrañas” (con ningún gen SV40) se pueden llevar a inserciones de genes extraños de hasta 5 kb y se hizo a títulos similares. Dr. Strayer observó que los niveles más bajos de expresión de la proteína pueden no ser necesariamente una desventaja para la generación de respuestas inmunes sobre todo porque el vector en sí es relativamente no antigénico (no provoca respuestas de anticuerpos de neutralización), y son posibles por lo tanto múltiples aumenta con el mismo vector (la explicación es que SV40 entra en las células a través de caveolae, y un sistema de transporte microtubular toma el virión directamente al núcleo donde se entra y ONU-capas, por lo que, en la entrada, SV40 evita endocítica / vías fagocíticas y sus proteínas de la cápside proteínas de la cápside no se expresan ni procesado como antígenos).

Dr. Strayer informó algo idiosincrásico pero claramente simplificado ensayos de respuesta inmune en las células de bazo obtenidas de VIH-1NL4-3 y SIVmac239 env, GAG y ratones BALB / c inmunizados tat-(por ejemplo, en ensayos de CTL “directo”, se utiliza de forma estable transfectadas, clonado, que expresan el antígeno de histocompatibilidad células diana P815, con una sola célula suspensiones de células no estimuladas / no seleccionados efectoras añadidos directamente a las células antígeno-P815 marcadas con 51Cr). Los datos de su laboratorio muestran lo siguiente: rSV40s expresan estos antígenos de VIH y SIV, y los resultados de inmunogenicidad son en gran parte comparable con estos diferentes insertos (por razones de tiempo, no se mostraron los datos de expresión explícita, aunque se muestran las DC transducidas-nef de VIH), múltiples inyecciones puede aumentar las respuestas, la inmunidad generada puede ser de larga duración (rSVgp120 provocó la memoria CMI> 1 año en comparación con el VIH Env solo), la IL-12 se aceleró CMI, e IL-15 se aceleró el desarrollo de la memoria respuestas CMI, CMI fueron vistos a pesar BALB / c ratones que tienen típicamente débiles respuestas de tipo 1, rSVgp120 provocaron fuertes respuestas de anticuerpos frente a gp120 del VIH por sí solo, inoculaciones repetidas de rSVgag impulsaron anticuerpos anti-gag suero. los datos de anticuerpos en ratones inoculados con multiplican rSV40 HBsAg prestan apoyo a este enfoque (se requieren de 3 a 7 inoculaciones con el mismo vector rSV40 para mostrar estadísticamente diferentes niveles en comparación con los controles a P <0,05) .; El Dr. Strayer acredita adecuadamente sus propios asociados de laboratorio y colaboradores. Strayer laboratorio: Hayley McKee, Sandra Calarota, Rumi Kondo, y Patricia T'sao, Feitelson Lab: Mark y Bill Feitelson Sun, Universidad de Navarra en España: María Vera, Puri Fortes, y Jesús Prieto, theernment. El Dr. William Jacobs, Howard Hughes Medical Institute El Dr. Bill Jacobs presentó en estrategias para generar recombinante micobacterias Las vacunas contra la tuberculosis, la malaria y el VIH. Ventajas de recombinante Mycobacteria Mostró datos considerable sobre por qué cree que una vacuna derivada de Mycobacterium tuberculosis es más seguro y puede proteger mejor que la BCG. Con este fin se ha desarrollado tres cepas mutantes dobles eliminados de MTB atenuada, 2 no replicante y una replicante .; Los mutantes no replicante replicar mutantes Como una prueba de concepto datos con el mc26030 mutante mostró replicación Dr. Jacobs también mostró que la supresión de la NlaA factor anti-apoptóticos, que permite a M. tuberculosis a sobrevivir más tiempo en los macrófagos, puede mejorar la inmunogenicidad de las vacunas atenuadas MTB, mediante la exposición de más antígenos al sistema inmune. Para el VIH demostró que las construcciones con Mycobacterium smegmatis podían expresar Env del VIH como de superficie, secretada, o antígenos intracelulares y también podría ser utilizado como un vector de administración de ADN. Vectores de virus SV40 Los vectores de Mycobacterium Listeria Vectores En el trabajo realizado con la Norma Letvin, los resultados de un primer experimento de ADN impulso de ADN de una sola dosis / / en ratones utilizando una M. smegmatis recombinante VIH-1 gp120 HXBc2 expresando plásmido mostró el primer produjo más respuesta de las células T CD8 que cuando seguido por el impulso. Hubo un efecto dosis-respuesta ligera con 108 UFC ser mejor que 106 UFC. Los resultados in vitro a través de un ensayo ELISPOT mostró que el mismo plásmido provocó una respuesta específica para el VIH de células T CD8 que era 27 veces mejor que el vector vacío. En colaboración con el grupo de Duke recombinante expresando M. smegmatis Grupo M consenso (con6) sobres gp120 y fueron compuestos gp140CF. Estos se utilizaron para cebar (2x dosis de 108 o 109 UFC) por un impulso de proteínas Env con6 rgp140CF recombinante (50 ug). La respuesta de anticuerpos anti-gp140 del VIH fue estadísticamente significativa (p <0,05) en comparación con M. smegmatis plásmido vacío cebado / rgp140CF 50ug impulso de proteínas y el impulso de proteínas sin primer solo. El Dr. Jacobs también describió su trabajo vacuna contra la malaria con BCG recombinante que expresa la proteína PfMSP1-19 de Plasmodium falciparum. ratones Balb / c inmunizados con rBCG mostraron respuestas de anticuerpos y de células T a PfMSP1-19. El Dr. Jacobs cree que las vacunas recombinantes de micobacterias pueden ofrecer triple protección contra el VIH, la malaria y la tuberculosis. Dr. Elizabeth Hohmann, Hospital General de Massachusetts Pequeños estudios clínicos exploratorios pueden proporcionar la seguridad y la inmunogenicidad de datos que ayudará a desarrollo clínico directa de vectores bacterianos tales como L. monocytogenes. Existen varias ventajas al uso de Listeria como un vector: 1) la protección está mediada por células T CD8 + restringida de clase I del MHC en ratones, 2) Se toma por tanto los macrófagos y las células dendríticas, 3) puede ser eficaz tanto para la profiláctica y aplicaciones terapéuticas, 4) no contiene LPS, 5) la exposición anterior pueden no ser un problema para las vacunas, y 6) Listeria sólo en raras ocasiones causa la enfermedad a pesar de que está presente en los alimentos y el agua. Limitaciones para el uso de Listeria incluyen: 1) puede causar bacteriemia e infección del SNC, 2) las mujeres embarazadas están en riesgo de aborto, 3) pacientes con VIH están en riesgo de infección, 4) la biología humana, la excreción y la inmunología no se conocen bien. Para los estudios en humanos la vía oral se puede usar para inducir la inmunidad de la mucosa. La seroconversión de IgG e IgA se ve generalmente. Las respuestas inmunes se pueden medir también por ELISPOT. La cepa de la vacuna mutante Listeria delta-acta / delta-InlB infecta a los fagocitos, pero no que no son fagocitos. Se elimina rápidamente del hígado y es menos tóxico. Ellos han hecho un codón optimizado Gag del VIH para insertar Listeria y están trabajando para hacer una vacuna atenuada muerta más, pero metabólicamente activa. En resumen, esto no es un organismo muy persistente, hay buenas estrategias de atenuación disponibles, y son posibles los estudios en humanos. El Dr. Stephen Udem, Farmacéuticos Wyeth Vesicular virus de la estomatitis (VSV) es una envuelta, ARN de cadena negativa, la replicación del virus lítico rápidamente que es un patógeno menor del ganado y que ocasionalmente puede causar infecciones generalmente asintomáticas de los seres humanos. La infección con estos virus se limita a las membranas mucosas orales y de las vías respiratorias. El virus codifica proteínas (5 nucleocápside, fosfoproteína subunidad de la polimerasa, matriz, glicoproteína G de proteínas, y la proteína L de la polimerasa); este sencillo genoma puede ser manipulado fácilmente para introducir genes extraños, que se expresan con firmeza, y para mezclar el orden gen que produce la atenuación; atenuación también se puede producir por diversas deleciones de genes y las mutaciones sensibles a la temperatura. Incluso los virus atenuados parecen inducir fuertes respuestas inmunes (de la mucosa, así como respuestas sistémicas) a ambos antígenos virales y insertados; y hay poca inmunidad preexistente en la población humana. El virus crece de manera eficiente en líneas celulares continuas y el genoma de ARN no se recombina ni integrarse en el genoma del huésped. Todas estas propiedades hacen de este virus un buen candidato para un vector de vacuna. Con respecto al tema de la reunión (persistente inmunidad vector impulsada) se afirmó que, si bien VSV induce infección persistente en los insectos y algunos virus mutantes pueden inducir infección persistente de células de mamífero en cultivo, no hay evidencia de la persistencia del virus de tipo salvaje en color natural anfitriones (ganado vacuno, cerdos, caballos), ni existe evidencia de la persistencia de VSV en peso o atenuado en ratones, hurones, o PNS tras inoculaciones de dosis altas. Sin embargo, un virus de ARN de cadena negativa similares, el sarampión, puede causar infecciones persistentes raros de los seres humanos (estos tienen graves consecuencias debido a la naturaleza neurotrópico del virus del sarampión); esta persistencia parece ser mayor en los animales experimentales por mutaciones que reducen la producción de partículas de virus infecciosas (incluyendo mutaciones en el gen de la matriz sarampión que es análoga a la matriz de genes VSV o las proteínas F y H que tienen alguna analogía a la proteína VSV G) . Por lo tanto, puede ser posible crear vectores de VSV persistentes mediante la mutación de las proteínas M o G. Tales virus defectuosos pueden ser fácilmente propagados por complementación en una línea celular de empaquetamiento. Las ventajas potenciales de las vacunas vectorizadas VSV persistentes incluyen: larga duración de la respuesta inmune y la seguridad de ninguna integración del vector. Sin embargo, no está claro si la exposición persistente a los antígenos del vector y de inserción se inducen las respuestas inmunes más apropiados, así como si la infección persistente puede controlarse limitando la duración y la difusión, o lo que serán las consecuencias a largo plazo de la infección persistente VSV. El Dr. Haynes se refiere al grupo a una carta (Anexo 1) que resume 6 principales características de cada uno de los 12 vectores tratados en esta reunión e indicando las deficiencias actuales en el conocimiento. Las características fueron las siguientes: proporcionar una respuesta inmunitaria persistente; afectados por inmunidad preexistente; adecuado como una vacuna de primera; adecuado como un impulso; proporcionar inmunidad de la mucosa de la inmunización de la mucosa; y proporcionar inmunidad de la mucosa de la inmunización sistémica. Los miembros del grupo revisaron los términos y respondieron "sí", "no" o "desconocido" para cada uno. En general, el gráfico revela un gran número de incógnitas, lo que indica la necesidad de investigación en muchas áreas. Teniendo en cuenta la cartera de vectores actualmente reciben ayudas de DAIDS, el grupo de trabajo recomienda que considere la posibilidad de DAIDS apoyo de sistemas de vectores prometedoras que actualmente no están recibiendo el apoyo DAIDS sustanciales ', incluyendo rAAV y vectores de adenovirus competentes para la replicación. El Grupo de Trabajo también estaba interesado en las actualizaciones en otros sistemas de vectores prometedores que no fueron presentados en el taller, incluyendo virus de la poliomielitis y el sarampión vectores del virus de la audición. Virus de la estomatitis vesicular Discusión y recomendaciones del taller